view in publisher's site

Plasmid‐free T7‐based Escherichia coli expression systems

Abstract In order to release host cells from plasmid‐mediated increases in metabolic load and high gene dosages, we developed a plasmid‐free, T7‐based E. coli expression system in which the target gene is site‐specifically integrated into the genome of the host. With this system, plasmid‐loss, a source of instability for conventional expression systems, was eliminated. At the same time, system leakiness, a challenging problem with recombinant systems, was minimized. The efficiency of the T7 RNA polymerase compensates for low gene dosage and provides high rates of recombinant gene expression without fatal consequences to host metabolism. Relative to conventional pET systems, this system permits improved process stability and increases the host cell's capacity for recombinant gene expression, resulting in higher product yields. The stability of the plasmid‐free system was proven in chemostat cultivation for 40 generations in a non‐induced and for 10 generations in a fully induced state. For this reason plasmid‐free systems benefit the development of continuous production processes with E. coli. However, time and effort of the more complex cloning procedure have to be considered in relation to the advantages of plasmid‐free systems in upstream‐processing. Biotechnol. Bioeng. 2010. 105: 786–794. © 2009 Wiley Periodicals, Inc.

سیستم‌های بیانی coli - based T۷ - based Escherichia

چکیده به منظور آزاد کردن سلول‌های میزبان از طریق افزایش در بار متابولیک و مقادیر بالای ژنی، ما یک E - آزاد و مبتنی بر plasmid را ایجاد کردیم. سیستم بیانی coli که در آن ژن هدف به طور اختصاصی در ژنوم میزبان ادغام می‌شود. با این سیستم، از دست دادن پلاسمید، یک منبع ناپایداری برای سیستم‌های بیان مرسوم حذف شد. در همان زمان، سیستم leakiness، یک مشکل چالش برانگیز با سیستم‌های نوترکیب، به حداقل رسید. کارایی پلی مراز T۷ پلیمراز برای دوز پایین ژن تکثیر شده و نرخ بالای بیان ژن نوترکیب را بدون عواقب کشنده برای متابولیسم میزبان فراهم می‌کند. این سیستم نسبت به سیستم‌های pet مرسوم، پایداری فرآیند را بهبود بخشیده و ظرفیت cell's میزبان را برای بیان ژن نوترکیب افزایش می‌دهد که منجر به بازده محصول بیشتر می‌شود. ثابت شد که پایداری سیستم بدون پلاسمید در کشت chemostat برای ۴۰ نسل در یک حالت القا شده و ۱۰ نسل در حالت کاملا القا شده ثابت شده‌است. به همین دلیل سیستم‌های بدون پلاسمید از توسعه فرایندهای تولید پیوسته با E بهره می‌برند. coli انجام شد. با این حال، زمان و تلاش فرآیند شبیه‌سازی پیچیده‌تر باید در رابطه با مزایای سیستم‌های بدون پلاسمید در پردازش بالادست در نظر گرفته شود. Biotechnol. Bioeng. ۲۰۱۰. ۱۰۵: ۷۸۶ - ۷۹۴. ۲۰۰۹ ویلی Periodicals، شرکت Inc.

ترجمه شده با

Download PDF سفارش ترجمه این مقاله این مقاله را خودتان با کمک ترجمه کنید
سفارش ترجمه مقاله و کتاب - شروع کنید

95/12/18 - با استفاده از افزونه دانلود فایرفاکس و کروم٬ چکیده مقالات به صورت خودکار تشخیص داده شده و دکمه دانلود فری‌پیپر در صفحه چکیده نمایش داده می شود.