view in publisher's site

Soluble expression of single-chain variable fragment (scFv) in Escherichia coli using superfolder green fluorescent protein as fusion partner

Single-chain variable fragment (scFv) has great prospect in medical therapies and diagnostic applications due to its binding affinity and low immunogenicity. However, the application of scFv is limited by its heterologous expression facing challenges of insoluble aggregation. sfGFP has been developed as fusion tag to facilitate the solubility of fusion partner in Escherichia coli. We designed fusion protein of anti-influenza PB2 scFv at C-terminus of sfGFP and successfully obtained soluble expression of sfGFP-scFv-His in Escherichia coli. The expression level of sfGFP-scFv-His reached at 20 mg/L of bacterial culture when the culture was induced with 0.1 mM IPTG at 18 °C for 16 h. And 6 mg scFv-His was obtained from the cleavage of 10 mg pure sfGFP-scFv-His with TEV protease. In addition, we found that sfGFP-scFv-His was more stable than scFv-His in chicken serum, suggesting that sfGFP not only facilitated the solubility of scFv in Escherichia coli, but also promoted the stability of scFv. The immunologic activity of sfGFP-scFv-His was confirmed by Western blot and ELISA; the results showed that anti-PB2 sfGFP-scFv-His exhibited specific binding to PB2. Hemagglutination and comparative real-time RT-PCR analysis indicated that sfGFP-scFv-His and scFv-His inhibited the replication of H1N1 influenza virus in the infected A549 cells. These results further develop the application of scFv as an agent, such as anti-influenza. Furthermore, soluble expression of scFv using sfGFP as fusion partner provide a cost-effective preparation model for manufacturing scFv against pandemic disease.

بیان Soluble قطعه متغیر تک زنجیره‌ای (scfv)در تاکید بر نوع تاکید " = Escherichia < / تاکید > با استفاده از پروتئین فلورسنت سبز superfolder به عنوان شریک فیوژن

قطعه متغیر تک زنجیره‌ای (scfv)به دلیل تمایل به اتصال و ایمنی زایی پایین، در درمان‌های پزشکی و کاربردهای تشخیصی زیادی دارد. با این حال، کاربرد scfv با بیان heterologous خود که با چالش‌های تراکم نامحلول روبرو است، محدود می‌شود. sfGFP به عنوان برچسب فیوژن ایجاد شده‌است تا قابلیت انحلال شریک فیوژن را در اشرشیا کولی تسهیل کند. ما پروتئین الحاقی of - anti را در پایانه C - terminus of طراحی کردیم و بیان محلول of - scfv - او را در اشرشیا کولی بدست آوردیم. سطح بیان of - scfv - در زمانی که کشت با ۰.۱ میلی مولار iptg در ۱۸ درجه سانتی گراد به مدت ۱۶ ساعت ایجاد شد، به ۲۰ میلی‌گرم در لیتر فرهنگ باکتری‌ها رسید. و ۶ mg scfv - His از تقسیم ۱۰ میلی‌گرم sfGFP خالص - scfv - His با پروتئاز TEV بدست آمد. علاوه بر این، ما دریافتیم که sfGFP - scfv - او more از scfv - او در سرم مرغ است، که نشان می‌دهد sfGFP نه تنها حلالیت of را در اشرشیا کولی تسهیل می‌کند، بلکه پایداری of را نیز افزایش می‌دهد. فعالیت immunologic of - scfv - His - His توسط وسترن بلات و الایزا تایید شد؛ نتایج نشان داد که anti - pb۲ - scfv - His دارای اتصال اختصاصی به pb۲ است. آنالیز hemagglutination و real - time نسبی RT - PCR نشان داد که sfGFP - scfv - His و scfv - او تکثیر ویروس آنفلوآنزای خوکی را در سلول‌های A۵۴۹ آلوده مهار کرد. این نتایج بیشتر کاربرد of را به عنوان یک عامل، مانند anti، توسعه می‌دهند. علاوه بر این، بیان محلول of با استفاده از sfGFP به عنوان شریک فیوژن، یک مدل آماده‌سازی موثر برای تولید scfv در برابر بیماری همه‌گیر را فراهم می‌کند.

ترجمه شده با

Download PDF سفارش ترجمه این مقاله این مقاله را خودتان با کمک ترجمه کنید
سفارش ترجمه مقاله و کتاب - شروع کنید

95/12/18 - با استفاده از افزونه دانلود فایرفاکس و کروم٬ چکیده مقالات به صورت خودکار تشخیص داده شده و دکمه دانلود فری‌پیپر در صفحه چکیده نمایش داده می شود.