view in publisher's site

Technical aspects of typing for HLA-DP alleles using allele-specific DNA in vitro amplification and sequence-specific oligonucleotide probes

The polymerase chain reaction (PRC) is an effective method for in vitro DNA amplification which combined with probing with synthetic oligonucleotides can be used for, e.g., HLA-typing. We have studied the technical aspects of HLA-DP typing with the technique. DNA from mononuclear nucleated cells was extracted with either a simple salting out method or phenol/chloroform. Both DNAs could be readily used for PCR. The MgC2 concentration of the PCR buffer and the annealing temperature of the thermal cycle of the PCR were the two most important variables. The MgCl2 concentration and the temperature must be carefully titrated for each primer pair in the PCR. The influence of mismatches between the primer and the DNA template were studied and we found that, by using primers differing only from each other at the 3′ end, cross-amplification of closely homologous alleles could be avoided. Thus, single base mismatches may be detected in the PCR and typing for HLA-DP gene variants, which differ for only one base, may be performed.

جنبه‌های فنی تایپ برای آلل های HLA - DP با استفاده از DNA اختصاصی آلل در تکثیر آزمایشگاهی و پروب های الیگونوکلئوتیدی خاص توالی: تشخیص عدم تطابق یک باز

واکنش زنجیره پلیمراز (PRC)یک روش موثر برای تکثیر DNA در شرایط آزمایشگاهی است که با پروب کردن با الیگونوکلئوتیدهای مصنوعی ترکیب می‌شود، برای مثال، HLA - typing. ما جنبه‌های فنی تایپ HLA - DP را با این تکنیک مطالعه کرده‌ایم. DNA سلول‌های هسته‌دار تک هسته‌ای با روش ساده نمک اشباع یا فنول / کلروفرم استخراج شد. هر دو DNA را می توان به آسانی برای PCR استفاده کرد. غلظت MgC۲ بافر PCR و دمای تابکاری چرخه گرمایی PCR دو متغیر مهم بودند. غلظت MgCl [ ۲ ] و دما باید به دقت برای هر جفت آغازگر در PCR تی‌تر شود. تاثیر عدم تطابق بین پرایمر و قالب DNA مورد مطالعه قرار گرفت و ما دریافتیم که با استفاده از پرایمرهای متفاوت از یکدیگر در انتهای ۳ '، می توان از تکثیر متقابل آلل های مشابه نزدیک جلوگیری کرد. بنابراین، عدم تطابق تک پایه ممکن است در PCR تشخیص داده شود و تایپ برای انواع ژن HLA - DP، که تنها برای یک پایه متفاوت است، ممکن است انجام شود.
ترجمه شده با


پر ارجاع‌ترین مقالات مرتبط:

  • مقاله Immunology
  • ترجمه مقاله Immunology
  • مقاله ایمنی‌شناسی
  • ترجمه مقاله ایمنی‌شناسی
  • مقاله Immunology and Allergy
  • ترجمه مقاله Immunology and Allergy
  • مقاله ایمنی‌شناسی و آلرژی
  • ترجمه مقاله ایمنی‌شناسی و آلرژی
سفارش ترجمه مقاله و کتاب - شروع کنید

با استفاده از افزونه دانلود فایرفاکس چکیده مقالات به صورت خودکار تشخیص داده شده و دکمه دانلود فری‌پیپر در صفحه چکیده نمایش داده می شود.