view in publisher's site

A simple linearization method unveils hidden enzymatic assay interferences

Highlights•Kinetic analysis of progress curves is shown to reveal enzymatic assay interferences.•The new linearization method (LM) requires no additional experiments to be applied.•The LM can be routinely used as a stringent quality check of enzymatic assays.•Real case-studies are presented to illustrate the applicability of the new method.•This tool is expected to increase the reproducibility of enzymology data.AbstractEnzymes are among the most important drug targets in the pharmaceutical industry. The bioassays used to screen enzyme modulators can be affected by unaccounted interferences such as time-dependent inactivation and inhibition effects. Using procaspase-3, caspase-3, and α-thrombin as model enzymes, we show that some of these effects are not eliminated by merely ignoring the reaction phases that follow initial-rate measurements. We thus propose a linearization method (LM) for detecting spurious changes of enzymatic activity based on the representation of progress curves in modified coordinates. This method is highly sensitive to signal readout distortions, thereby allowing rigorous selection of valid kinetic data. The method allows the detection of assay interferences even when their occurrence is not suspected a priori. By knowing the assets and liabilities of the bioassay, enzymology results can be reported with enhanced reproducibility and accuracy. Critical analysis of full progress curves is expected to help discriminating experimental artifacts from true mechanisms of enzymatic inhibition.Graphical abstractDownload : Download high-res image (229KB)Download : Download full-size image

یک روش خطی سازی ساده، مداخلات سنجش آنزیمی پنهان را آشکار می‌سازد.

نکات برجسته تجزیه و تحلیل کینتیک منحنی‌های پیشرفت برای نشان دادن مداخلات سنجش آنزیمی نشان‌داده شده‌است. * روش خطی سازی جدید (LM)نیاز به هیچ آزمایش اضافی برای اعمال ندارد. * LM را می توان به طور معمول به عنوان کنترل کیفی دقیق سنجش‌های آنزیمی استفاده کرد. * مطالعات موردی واقعی برای نشان دادن کاربرد روش جدید ارائه شده‌است. انتظار می‌رود که این ابزار قابلیت تکرار داده‌های آنزیمی را افزایش دهد. آنزیم‌های abst از جمله مهم‌ترین اهداف دارویی در صنعت داروسازی هستند. سنجش‌های زیستی مورد استفاده برای غربال کردن مدولاتورهای آنزیم می‌تواند تحت‌تاثیر مداخلات حساب‌نشده مانند غیر فعال‌سازی وابسته به زمان و اثرات بازدارندگی قرار گیرد. با استفاده از پروکاسپاز ۳، کاسپا ز -۳ و آلفا - ترومبین به عنوان آنزیم‌های مدل، نشان می‌دهیم که برخی از این اثرات تنها با نادیده گرفتن فازه‌ای واکنشی که از اندازه‌گیری‌های اولیه سرعت پیروی می‌کنند، حذف نمی‌شوند. بنابراین ما یک روش خطی سازی (LM)را برای تشخیص تغییرات جعلی فعالیت آنزیمی براساس نمایش منحنی‌های پیشرفت در مختصات اصلاح‌شده پیشنهاد می‌کنیم. این روش به شدت به انحراف خواندن سیگنال حساس است، در نتیجه امکان انتخاب دقیق داده‌های کینتیکی معتبر را فراهم می‌کند. این روش امکان تشخیص مداخلات سنجش را حتی زمانی که احتمال وقوع آن‌ها وجود ندارد، فراهم می‌کند. با دانستن دارایی‌ها و تعهدات حاصل از سنجش زیستی، نتایج آنزیمی را می توان با افزایش تکرارپذیری و دقت گزارش کرد. انتظار می‌رود که تجزیه و تحلیل بحرانی منحنی‌های پیشرفت کامل به تمایز آثار تجربی از مکانیسم‌های واقعی بازدارندگی آنزیمی کمک کند. جداسازی تجربی دانلود: دانلود تصویر با کیفیت بالا (۲۲۹ KB)دانلود: دانلود تصویر با اندازه کامل
ترجمه شده با


پر ارجاع‌ترین مقالات مرتبط:

  • مقاله Biochemistry
  • ترجمه مقاله Biochemistry
  • مقاله بیوشیمی
  • ترجمه مقاله بیوشیمی
  • مقاله Organic Chemistry
  • ترجمه مقاله Organic Chemistry
  • مقاله شیمی آلی
  • ترجمه مقاله شیمی آلی
  • مقاله Biophysics
  • ترجمه مقاله Biophysics
  • مقاله بیوفیزیک
  • ترجمه مقاله بیوفیزیک
سفارش ترجمه مقاله و کتاب - شروع کنید

با استفاده از افزونه دانلود فایرفاکس چکیده مقالات به صورت خودکار تشخیص داده شده و دکمه دانلود فری‌پیپر در صفحه چکیده نمایش داده می شود.