view in publisher's site

Effect of PEGylation on Protein Hydrodynamics

Mol Pharm. 2012 Apr 2;9(4):762-73. doi: 10.1021/mp200470c. Epub 2012 Mar 22.Effect of PEGylation on protein hydrodynamics.Gokarn YR1, McLean M, Laue TM.Author information1Department of Biochemistry, University of New Hampshire, Durham, New Hampshire 06824, USA. [email protected] studied the effect of PEGylation on protein hydrodynamic behavior using hen egg-white lysozyme (HEWL) as a model protein. HEWL was PEGylated with a linear, 20 kDa PEG using reductive amination to produce PEG1-, PEG2-, and PEG3-HEWL. Near- and far-UV-CD spectroscopy revealed no significant effect of PEGylation on HEWL higher order structure. SDS-PAGE, mass spectrometry, online static light scattering (SLS) and sedimentation velocity analytical ultracentrifugation (SV-AUC) were employed to characterize the heterogeneity and molecular weights of the purified PEG-HEWL molecules, the results of which underscored the importance of using first-principle based methods for such analyses along with the underlying complexities of characterizing PEG-protein conjugates. Hydrodynamic characterization of various linear and branched PEGs (5-40 kDa) and PEG-HEWL molecules was performed using dynamic light scattering (DLS) and SV-AUC. The PEG polymer exhibited a random-coil conformation in solution with the M(w) ∝ R(h)(n) scaling relationship yielding a scaling exponent (n) = 2.07. Singly branched PEGs were also observed to exhibit random-coil behavior with Stokes radii identical to those of their linear counterparts. SV-AUC studies of PEG-HEWL showed PEG has a "parachute" like effect on HEWL, and dramatically increases the frictional drag; PEG-HEWL also exhibited random-coil-like characteristics in solution (n = 1.8). The sedimentation coefficient (s) of PEG-HEWL remained invariant with increasing degree of PEGylation, indicating that the increase in molecular mass from PEG was compensated by an almost equivalent increase in frictional drag. Our studies draw caution to using SV-AUC for the characterization of size heterogeneity of PEG-protein mixtures.PMID: 22353017 DOI: 10.1021/mp200470c [Indexed for MEDLINE] ShareMeSH terms, SubstancesMeSH termsHydrodynamicsPolyethylene Glycols/chemistry*Proteins/chemistry*SubstancesProteinsPolyethylene GlycolsLinkOut - more resourcesFull Text SourcesAmerican Chemical Society

تاثیر of بر hydrodynamics پروتئین:

سوفی مال Pharm. ۲۰۱۲: ۲؛ ۹ (۴): ۷۶۲ - ۷۳. doi: ۱۰.۱۰۲۱ / mp۲۰۰۴۷۰c. Epub ۲۰۱۲: ۲۲.Effe ct of of on on protein rn، yr۱ M، Laue TM.Auth یا information۱Department of، دانشگاه نیو همپشایر، دوره‌ام، نیوهمپشایر ۰۶۸۲۴، آمریکا. در این تحقیق اثر of بر رفتار هیدرودینامیک پروتئین با استفاده از لیزوزیم سفید تخم‌مرغ به عنوان یک پروتئین مدل مورد بررسی قرار گرفت. HEWL با یک PEG خطی، ۲۰ کیلو دالتون، با استفاده از amination کاهنده برای تولید peg۱ -، PEG۲ -، و PEG۳ - HEWL استفاده شد. طیف‌سنجی نزدیک و دور از UV - CD تاثیر قابل‌توجهی بر ساختار رده بالای HEWL نشان نداد. روش‌های SDS - PAGE، طیف‌سنجی جرمی استاتیک آنلاین (SLS)و سرعت ته‌نشینی برای مولکول‌های analytical - HEWL به کار گرفته شدند که نتایج آن بر اهمیت استفاده از روش‌های مبتنی بر اصل اول برای چنین آنالیزهای همراه با پیچیدگی‌های موجود در شناسایی conjugates پروتیین، تاکید کردند. سپس با استفاده از روش تفرق نوری پویا (DLS)و SV - AUC، مشخصه یابی hydrodynamic های مختلف و منشعب شده (۵ - ۴۰ کیلو دالتون)و PEG - HEWL مورد بررسی قرار گرفت. پلیمر PEG یک ترکیب تصادفی - مارپیچ را در محلول با تابع مقیاس بندی M (w)(n)نشان می‌دهد که دارای یک نمای مقیاس بندی (n)= ۲.۰۷. singly شاخه‌ای است. مطالعات SV - AUC نشان داد که PEG دارای یک "چترنجات" مانند اثر روی HEWL است و به طور چشمگیری باعث افزایش درگ اصطکاکی می‌شود. ضریب انتقال (s)of - HEWL با افزایش درجه of تغییر ناپذیر باقی ماند و نشان می‌دهد که افزایش جرم مولکولی از PEG با افزایش تقریبا معادل اصطکاک اصطکاکی جبران می‌شود. مطالعات ما با استفاده از AUC برای شناسایی ناهمگونی اندازه مواد PEG - پروتیین: ۲۲۳۵۳۰۱۷ / mp۲۰۰۴۷۰c [ Indexed برای MEDLINE ]، terms / mp۲۰۰۴۷۰c [ Indexed برای MEDLINE ]، SubstancesMeSH / glycols / شیمی * Proteins / شیمی * SubstancesProteinsPolyethylene GlycolsLinkOut - بیشتر از جامعه شیمیایی SourcesAmerican

ترجمه شده با

Download PDF سفارش ترجمه این مقاله این مقاله را خودتان با کمک ترجمه کنید
سفارش ترجمه مقاله و کتاب - شروع کنید

95/12/18 - با استفاده از افزونه دانلود فایرفاکس و کروم٬ چکیده مقالات به صورت خودکار تشخیص داده شده و دکمه دانلود فری‌پیپر در صفحه چکیده نمایش داده می شود.