view in publisher's site

Single-Step Procedure for the Isolation of Proteins at Near-Native Conditions from Mammalian Tissue for Proteomic Analysis on Antibody Microarrays

The process of extracting comprehensive proteome representations is a crucial step for many proteomic studies. While antibody microarrays are an evolving and promising methodology in proteomics, the issue of protein extraction from tissues for this kind of analysis has never been addressed. Here, we describe a single-step extraction buffer for the isolation of proteins from mammalian tissues under native conditions in an effective and reproducible manner. Protein was extracted from cell lines BxPC-3 and SU.86.86, rat organs (pancreas, liver, heart and lung) and human pancreatic cancer tissues using several buffer systems that contained individual nonionic or zwitterionic detergents in comparison to commercial extraction buffers. Also, detergent combinations were used that included at least one polymeric phenylethylene glycol, a long-chain amidosulfobetaine, cholate and a zwitterionic detergent. Extracts were analyzed for protein quantity and quality. The detergent cocktails exhibited superior extraction capacity. Additionally, they demonstrated a substantially higher recovery of membrane and compartmental proteins as well as much better preservation of protein functionality. Also, they did not interfere with subsequent analysis steps such as labeling. In Western blot and antibody microarray assays, they outperformed the other buffer systems, indicating that they should also be useful for other types of proteomic studies.

روش مرحله‌ای برای جداسازی پروتیین‌ها در شرایط نزدیک - بومی از بافت mammalian برای آنالیز proteomic در antibody Microarrays

فرآیند استخراج نمایش‌های جامع proteome یک گام مهم برای بسیاری از مطالعات proteomic است. در حالی که آنتی‌بادی microarrays یک روش تکاملی و نویدبخش در proteomics هستند، مساله استخراج پروتیین از بافت‌های مختلف برای این نوع تحلیل هرگز مورد بررسی قرار نگرفته است. در اینجا، یک حایل استخراج تک مرحله‌ای را برای جداسازی پروتئین‌ها از بافت‌های پستانداران تحت شرایط بومی در یک روش موثر و قابل تکرار توصیف می‌کنیم. پروتیین از خطوط سلولی BxPC - ۳ و SU استخراج شد. ۸۶.۸۶، اندام‌های موش (پانکراس، کبد، قلب و ریه)و سرطان لوزالمعده با استفاده از چندین سیستم حایل که حاوی مواد شوینده فردی و یا مواد شوینده فردی در مقایسه با buffers استخراج تجاری بود. همچنین، ترکیبات detergent مورد استفاده قرار گرفتند که شامل حداقل یک پلیمر phenylethylene پلی گلیکول، a زنجیره بلند، cholate و a zwitterionic بود. استخراج برای کمیت و کیفیت پروتیین مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. The مواد شوینده ظرفیت استخراج برتر را نشان می‌دهد. علاوه بر این، آن‌ها بهبود قابل‌توجهی از پروتئین‌های غشا و compartmental و حفظ بهتر عملکرد پروتئین را نشان دادند. همچنین، آن‌ها با مراحل آنالیز بعدی مانند برچسب زدن تداخل نداشتند. در سنجش وسترن بلات و سنجش آنتی‌بادی، آن‌ها به سیستم‌های بافر دیگر عملکرد بهتری نسبت دادند و نشان دادند که آن‌ها نیز باید برای انواع دیگر مطالعات proteomic نیز مفید باشند.

ترجمه شده با

Download PDF سفارش ترجمه این مقاله این مقاله را خودتان با کمک ترجمه کنید
سفارش ترجمه مقاله و کتاب - شروع کنید

95/12/18 - با استفاده از افزونه دانلود فایرفاکس و کروم٬ چکیده مقالات به صورت خودکار تشخیص داده شده و دکمه دانلود فری‌پیپر در صفحه چکیده نمایش داده می شود.