view in publisher's site

Lymphocytes as cellular vehicles for gene therapy in mouse and man.

The application of bone marrow gene therapy has been stalled by the inability to achieve stable high-level gene transfer and expression in the totipotent stem cells. We show that retroviral vectors can stably introduce genes into antigen-specific murine and human T lymphocytes in culture. Murine helper T cells were transduced with the retroviral vector SAX to express both neomycin-resistance and human adenosine deaminase genes. These cells were expanded in culture and selected for expression of neomycin resistance with G418. The gene insertion, selection, and culture expansion did not alter antigen specificity or growth characteristics of the T cells in vitro. To determine if cultured T cells might be used for gene therapy, their persistence and continued expression of the introduced genes was evaluated in nude mice transplanted with the SAX-transduced T cells. G418-resistant cells could be readily recovered from the spleens of recipients of transduced T cells for several months. In addition, recovered cells continued to produce human adenosine deaminase. Based on these observations, we studied cultured human tumor-infiltrating lymphocytes as a candidate cell for a trial of gene transfer in man. Exponential cultures of interleukin-2-stimulated tumor-infiltrating lymphocytes were efficiently transduced with the neomycin-resistance gene using the retroviral vector N2. Gene insertion and subsequent G418 selection did not substantially alter the growth characteristics, interleukin 2 dependence, membrane phenotype, or cytotoxicity profile of the transduced T cells. These studies provided a portion of the experimental evidence supporting the feasibility of the presently ongoing clinical trials of lymphocyte gene therapy in cancer as well as in patients with adenosine deaminase deficiency.

لمفوسیت ها به عنوان وسایل سلولی برای ژن‌درمانی در موش و انسان.

مقدمه: کاربرد ژن‌درمانی مغز استخوان با ناتوانی در دستیابی به انتقال و بیان سطح بالای پایدار ژن در سلول‌های بنیادی توانمند متوقف شده‌است. ما نشان می‌دهیم که بردارهای رتروویروسی می‌توانند به طور پایدار ژن‌ها را به درون مورین خاص آنتی‌ژن و لنفوسیت‌های T انسانی در محیط کشت وارد کنند. سلول‌های کمکی T مورین با بردار رتروویرال SAX برای بیان هر دو ژن مقاومت نئومایسین و آدنوزین دآمیناز انسانی منتقل شدند. این سلول‌ها در محیط کشت گسترش یافتند و برای بیان مقاومت نئومایسین با G۴۱۸ انتخاب شدند. درج ژن، انتخاب و گسترش کشت ویژگی آنتی‌ژن یا ویژگی‌های رشد سلول‌های T را در شرایط آزمایشگاهی تغییر نداد. برای تعیین اینکه آیا سلول‌های T کشت شده ممکن است برای ژن‌درمانی مورد استفاده قرار گیرند، پایداری و بیان پیوسته ژن‌های معرفی‌شده در موش‌های برهنه پیوند شده با سلول‌های T ترابرد SAX مورد ارزیابی قرار گرفت. سلول‌های مقاوم به G۴۱۸ می‌توانند به آسانی از طحال دریافت کنندگان سلول‌های T ترانسفکت شده به مدت چند ماه بازیابی شوند. علاوه بر این، سلول‌های بازیابی شده به تولید آدنوزین دآمیناز انسانی ادامه دادند. براساس این مشاهدات، ما لنفوسیت‌های در حال نفوذ تومور انسانی کشت شده را به عنوان یک سلول کاندید برای آزمایش انتقال ژن در انسان مورد مطالعه قرار دادیم. کشت‌های اضافی لنفوسیت‌های نفوذ تومور تحریک‌شده با اینترلوکین ۲ به طور موثری با ژن مقاومت نئومایسین با استفاده از بردار رتروویرال N۲ انتقال داده شدند. درج ژن و پس از آن انتخاب G۴۱۸ به طور قابل‌توجهی ویژگی‌های رشد، وابستگی اینترلوکین ۲، فنوتیپ غشا یا مشخصات سیتوتوکسیسیته سلول‌های T ترانسفکت شده را تغییر نداد. این مطالعات بخشی از شواهد تجربی را در حمایت از امکان انجام آزمایش‌ها بالینی جاری ژن‌درمانی لنفوسیت در سرطان و نیز در بیماران با کمبود آدنوزین د - آمیناز فراهم کردند. CNN / jats: p.
ترجمه شده با


پر ارجاع‌ترین مقالات مرتبط:

  • مقاله Multidisciplinary
  • ترجمه مقاله Multidisciplinary
  • مقاله چندرشته‌ای
  • ترجمه مقاله چندرشته‌ای
سفارش ترجمه مقاله و کتاب - شروع کنید

با استفاده از افزونه دانلود فایرفاکس چکیده مقالات به صورت خودکار تشخیص داده شده و دکمه دانلود فری‌پیپر در صفحه چکیده نمایش داده می شود.